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雙光束紫外分光光度計(jì)的操作流程與常見(jiàn)實(shí)驗(yàn)方法分享

更新時(shí)間:2024-05-14    點(diǎn)擊次數(shù):560
   雙光束紫外分光光度計(jì)是一種常用的實(shí)驗(yàn)室儀器,用于測(cè)量樣品在紫外可見(jiàn)光區(qū)的吸光度,從而對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析。
 
  一、雙光束紫外分光光度計(jì)操作流程
  儀器準(zhǔn)備
  1.開(kāi)啟電源:首先確保儀器周圍沒(méi)有振動(dòng)和強(qiáng)磁場(chǎng)干擾,然后打開(kāi)儀器電源。
  2.預(yù)熱:讓儀器預(yù)熱至少30分鐘,以確保內(nèi)部組件達(dá)到穩(wěn)定的工作狀態(tài)。
  3.波長(zhǎng)校準(zhǔn):使用已知的校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn),如鐠釹濾波器或氘燈,校準(zhǔn)儀器的波長(zhǎng)。
  4.調(diào)整零點(diǎn):將樣品室蓋上,調(diào)整儀器的零點(diǎn),確保沒(méi)有光線透過(guò)。
 
  樣品準(zhǔn)備
  1.配制樣品溶液:根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,準(zhǔn)確稱量或量取樣品,溶解在適當(dāng)?shù)娜軇┲小?/span>
  2.準(zhǔn)備對(duì)照:如果需要,準(zhǔn)備相應(yīng)的對(duì)照樣品或空白溶液。
  3.調(diào)節(jié)樣品液位:將樣品池中液體的液位調(diào)至合適高度,通常要求液體表面與樣品池窗口平行。
 
  測(cè)量操作
  1.選擇波長(zhǎng):根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),設(shè)定所需的測(cè)定波長(zhǎng)。
  2.打開(kāi)樣品池蓋:輕輕打開(kāi)樣品池蓋,避免產(chǎn)生氣泡或擾動(dòng)液體。
  3.測(cè)量零點(diǎn):將對(duì)照樣品放入樣品池中,測(cè)量其吸光度,通常為零或接近零。
  4.測(cè)量樣品:將待測(cè)樣品放入樣品池中,記錄其吸光度值。
 
  數(shù)據(jù)處理
  1.計(jì)算吸光度:如果需要,對(duì)所得到的吸光度數(shù)據(jù)進(jìn)行必要的數(shù)學(xué)處理。
  2.繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:如果進(jìn)行了系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品測(cè)定,可以繪制吸光度與濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
  3.樣品分析:利用標(biāo)準(zhǔn)曲線或其他已知數(shù)據(jù),對(duì)未知樣品進(jìn)行分析計(jì)算。
 
  結(jié)果驗(yàn)證
  1.重復(fù)性測(cè)試:測(cè)定幾個(gè)相同樣品的吸光度,檢查結(jié)果的一致性。
  2.準(zhǔn)確性測(cè)試:通過(guò)與已知標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的比較,評(píng)估測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。
 
  關(guān)閉儀器
  1.關(guān)閉電源:實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,關(guān)閉儀器電源。
  2.清理樣品池:清理樣品池并干燥,以便下次使用。
  3.記錄數(shù)據(jù):詳細(xì)記錄實(shí)驗(yàn)過(guò)程和結(jié)果,包括波長(zhǎng)、樣品信息、測(cè)定數(shù)據(jù)等。
 雙光束紫外分光光度計(jì)
  二、常見(jiàn)實(shí)驗(yàn)方法
  直接吸光光度法
  適用于濃度較低的樣品,直接測(cè)定其吸光度,無(wú)需其他預(yù)處理。
 
  標(biāo)準(zhǔn)加入法
  通過(guò)逐級(jí)加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)溶液到待測(cè)樣品中,測(cè)定吸光度,以求得樣品中待測(cè)物的含量。
 
  競(jìng)爭(zhēng)抑制法
  利用抗體與抗原的競(jìng)爭(zhēng)抑制反應(yīng)來(lái)測(cè)定抗原的含量。
 
  熒光猝滅法
  通過(guò)熒光猝滅劑與目標(biāo)物質(zhì)結(jié)合導(dǎo)致熒光強(qiáng)度下降的原理,測(cè)定目標(biāo)物質(zhì)的濃度。
 
  酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)
  用于檢測(cè)和定量分析抗原或抗體的含量,基于酶標(biāo)記的抗體和底物顯色反應(yīng)。
 
  膠體金免疫層析試驗(yàn)
  一種快速檢測(cè)方法,常用于現(xiàn)場(chǎng)或初步篩查,例如藥物濫用檢測(cè)、傳染病標(biāo)志物檢測(cè)等。
 
  雙光束紫外分光光度計(jì)的操作并不復(fù)雜,但需要注意的是,在每次實(shí)驗(yàn)前都應(yīng)進(jìn)行充分的準(zhǔn)備工作,并嚴(yán)格按照操作規(guī)程執(zhí)行。

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